Orientador: Cristiano de Sousa Mota (Ciência ID: BA13-C0DD-E826)
DESCRIÇÃO:
Este projeto tem como objetivos a produção, caracterização bioquímica e cristalização de uma PHA sintetase de Pseudomonas mandelii. Análise estrutural e identificação dos resíduos que conferem especificidade para o substrato. O trabalho será dividido em 3 tarefas:
Tarefa 1 – Produção de proteína - Otimização do protocolo de expressão e purificação que permitirá obter grandes quantidades proteína;
Tarefa 2 – Caracterização bioquímica – A enzima será submetida a uma análise de oligomerização, ensaios de estabilidade, determinação de afinidade para substratos e ensaios cinéticos. Esta tarefa vai permitir classificar a enzima de acordo com a sua velocidade de catálise e preferência de substrato.
Tarefa 3 – Cristalização e primeiros passos na determinação da estrutura 3D – Diferentes condições de cristalização serão testadas e as mais promissoras serão otimizadas. Os cristais serão testados no difractómetro de raios X “in-house” ou em laboratórios de sincrotrão Europeus.